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產(chǎn)品中心

全自動外泌體熒光檢測分析系統(tǒng)
產(chǎn)品簡介:

NanoView公司所開發(fā)的全自動外泌體熒光檢測分析系統(tǒng)是一款無需純化的、全自動的可對單個外泌體進行表征分析的全新設(shè)備。該設(shè)備能夠提供全面的外泌體表征信息,包括外泌體粒徑大小、計數(shù)、分布、攜帶蛋白表達、生物標志物(CD9,CD81,CD63等)共定位等

產(chǎn)品型號:

更新時間:2024-08-20

廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家

訪問量:1710

服務(wù)熱線

400 0889 890

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產(chǎn)品介紹
品牌KTIMES/捷鈦儀器產(chǎn)地類別進口
應(yīng)用領(lǐng)域醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè)

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NanoView公司所開發(fā)的全自動外泌體熒光檢測分析系統(tǒng)是一款無需純化的、全自動的可對單個外泌體進行表征分析的全新設(shè)備。該設(shè)備能夠提供全面的外泌體表征信息,包括外泌體粒徑大小、計數(shù)、分布、攜帶蛋白表達、生物標志物(CD9,CD81,CD63等)共定位等。操作簡單,結(jié)果可靠。一經(jīng)推出,便引起了外泌體領(lǐng)域科研工作者的廣泛關(guān)注,短短兩年時間在全球已有50多個實驗室采用該技術(shù),發(fā)表重要文獻近百篇。

全自動外泌體熒光檢測分析系統(tǒng)基本原理是一種基于特異性免疫捕獲技術(shù),允許研究者直接分析特定群體的外泌體或外囊泡。通過配套的試劑盒,客戶一次性能夠分析多達9個不同的樣本,大大節(jié)省了時間和經(jīng)濟成本。兼容各種生物樣本,除了純化的外泌體之外,對于血液、尿液、惡性腫瘤、腹水中的外泌體也可直接檢測分析,大大拓展了研究范圍

應(yīng)用方向及主要特征


生物標記物共定位

最多可量化4種標記物的表達情況


計數(shù)分析

直接從樣品中計算抗原陽性外泌體的數(shù)量,無需提純


粒徑分析

高精度統(tǒng)計外泌體的顆粒大小及分布


檢測外泌體內(nèi)容物

使用ExoView Cargo試劑盒可探測外泌體內(nèi)部核酸的裝載情況,分析裝載率


熒光檢測

具備3個熒光通道,能夠探測單個蛋白的結(jié)合


線性工作流程

最高9個樣品的全自動分析


無須純化

無需擔心純化帶來的誤差,更精確的測量樣品間的表征和表達信息的差異


多重樣本分析

最多可使用6種表面標記物來篩選外泌體

外泌體粒徑分析

能夠?qū)?gt;50 nm的外泌體進行全方面的表征,無論是粒徑尺寸、粒徑分布還是外泌體的亞型均可在一次測試中得到。并且所用來測試的樣本無需進行純化,避免因純化帶來的樣本偏差。

分析不同大小和不同尺度的外泌體亞群,在CD171過表達系統(tǒng)中,100 nm以上的外泌體僅表達了CD171。


量化外泌體亞群

通過抗體捕獲的模式,能夠量化含有不同標記物的外泌體亞群,并對不同種群的外泌體進行特異性計數(shù)和分析。整個過程無需純化,并且線性范圍可跨越3個數(shù)量級。

TSPAN8陽性細胞外囊泡的稀釋曲線。使用1:3比例的梯度稀釋。用R2 = 0.9986計算與TSPAN8熒光數(shù)據(jù)的線性擬合。

檢測外囊泡中的裝載物

MISEV建議在表征外泌體和外囊泡時,應(yīng)當同時測量表面和載體蛋白。使用ExoView芯片可穿透外泌體,探測膜內(nèi)蛋白和載體。并且單次可定量3種表面、管腔蛋白。

檢測細胞外泌體內(nèi)的Syntenin。

WT細胞在未穿膜的條件下幾乎觀測不到Syntenin的信號。進行穿膜處理后可以觀測到Syntenin信號,而KO之后信號消失


生物標志物共定位

能夠在單個外泌體樣本上檢測多達4種標記物,并同時提供外泌體的其它表征數(shù)據(jù)諸如計數(shù)、顆粒尺寸統(tǒng)計等。


無需純化

只測量含有靶標抗原的特定細胞外泌體群體。僅需35 μL的稀釋樣品,即可直接獲得外泌體的表型、粒徑和計數(shù)信息。并且無需擔心污染物對測試的影響。

無論純化與否,Exoview均可進行分析



ExoView™ Kit 配置清單:


ExoView™

Tetraspanin Kits


CD9 - 捕獲抗體

CD63 - 捕獲抗體

CD81 - 捕獲抗體

Mouse IgG 陰性對照

CD9、CD63、CD81三色共標記熒光抗體。


ExoView™

Tetraspanin Plasma Kits


CD9 - 捕獲抗體

CD63 - 捕獲抗體

CD81 - 捕獲抗體

CD41a - 捕獲抗體

多達三種定制化捕獲抗體

同種陰性對照

CD9、CD63、CD81三色共標記熒光抗體。


ExoView™

Tetraspanin Custom Kits


CD9 - 捕獲抗體

CD63 - 捕獲抗體

CD81 - 捕獲抗體

多達三種定制化捕獲抗體

同種陰性對照

CD9、CD63、CD81三色共標記熒光抗體。


ExoView™

Cargo Kits


兼容所有ExoView Kit

標準 CD9, CD63和CD81 捕獲抗體

Mouse IgG 陰性對照

ExoView Cargo 試劑

CD9、CD63、CD81三色共標記熒光抗體。

Sytenin熒光抗體


應(yīng)用案例:

對不同體液中小RNA測序以篩選最佳的胞外RNA提取方法

exRNA profile會受到不同來源(細胞/組織),不同狀態(tài)(年齡/健康程度/器官狀態(tài))的影響,且由包括外泌體在內(nèi)的不同的載體運輸,加上不同的提取方法和檢測技術(shù),均會影響exRNA profile的測定結(jié)果?,F(xiàn)今的小RNA測序方法已經(jīng)可以準確地表征exRNA profile,因此合適的exRNA提取方法便至關(guān)重要。Srinivasan[1]等通過使用多種exRNA分離方法分離不同位點獲得的5種體液中的外泌體,分析結(jié)果后總結(jié)出了不同體液的適合分離方法。

其中,研究人員使用單個外泌體表型分析技術(shù)(Exoview)檢測了來源于人血漿的外泌體的蛋白marker表達,判斷出血漿外泌體根據(jù)蛋白marker主要分為CD63-/CD81+/CD9+和CD63+/CD81+/CD9+兩種。

人血漿外泌體蛋白表達分析


參考文獻:[1] Srinivasan, S., Yeri, A., Cheah, P. S., Chung, A., Danielson, K., De Hoff, P., ... & Laurent, L. C. (2019). Small RNA sequencing across diverse biofluids identifies optimal methods for exRNA isolation. Cell, 177(2), 446-462.


Brain Behavior and Immunity:脊髓損傷導(dǎo)致血清神經(jīng)炎癥相關(guān)納米顆粒中miRNA與CD81+外泌體水平的改變



脊髓損傷(SCI)會對機體產(chǎn)生系統(tǒng)性影響,導(dǎo)致呼吸、免疫、消化等功能異常,以及相關(guān)腦區(qū)產(chǎn)生神經(jīng)炎癥和退行性病變。有研究表明,SCI的病理與系統(tǒng)性影響可能與血液來源的因子如外泌體的運輸有關(guān);而在中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷模型中,外泌體可能參與了miRNA等炎性因子運輸導(dǎo)致炎癥擴散。Khan等[1]使用包括Exoview外泌體表型分析的多種技術(shù)詳細表征了SCI建模的小鼠血漿外泌體,發(fā)現(xiàn)損傷后外泌體數(shù)量、蛋白marker和內(nèi)容物均有明顯的變化,將SCI小鼠的外泌體注射入腦室還可誘發(fā)產(chǎn)生炎癥。

研究人員使用ExoView檢測了SCI血漿外泌體的粒徑、數(shù)量、熒光強度和共定位(圖1A)。外泌體在CD81和CD9區(qū)域產(chǎn)生特異性結(jié)合而被捕獲,而沒有CD63捕獲。根據(jù)干涉成像獲得外泌體尺寸分布,其中在50nm最多(圖1B&C)。熒光成像則檢測到了大量干涉成像檢測不出的尺寸小于50nm的外泌體(圖1D&E),CD81和CD9在大量外泌體上表型出熒光共定位,而CD63熒光則未被檢測到,這與圖1C結(jié)果一致(圖1F-H)。相比之下,NTA與流式分析無法檢測到尺寸小于50nm的外泌體。

圖1 ExoView檢測血漿外泌體的粒徑、數(shù)量、熒光強度和共定位


研究人員進一步比較了SCI組和對照組的血漿外泌體變化,結(jié)果表明,在損傷后1d的時間點,CD81外泌體數(shù)量相對對照組更高,與Western Blot的結(jié)果一致;而CD9外泌體數(shù)量則沒有統(tǒng)計學(xué)差異,與流式分析的結(jié)果一致(圖2A&B)?;趫D2H的CD81與CD9有大量的熒光共定位,檢測CD9外泌體的CD81熒光強度,由1d的熒光強度中位數(shù)差異可知,


圖2 ExoView檢測血漿外泌體的粒徑、數(shù)量、熒光強度和共定位


參考文獻:[1] Khan, N. Z., Cao, T., He, J., Ritzel, R. M., Li, Y., Henry, R. J., ... & Wu, J. (2020). Spinal cord injury alters microRNA and CD81+ exosome levels in plasma extracellular nanoparticles with neuroinflammatory potential. Brain, behavior, and immunity.





Cells:CD44糖蛋白在胃癌發(fā)生中的作用


CD44是一種跨膜糖蛋白,能夠介導(dǎo)細胞間與細胞-基質(zhì)間相互作用,主要配體為透明質(zhì)酸(HA)。研究表明,CD44與腫瘤的生長相關(guān),其在腫瘤細胞中高表達,且CD44與HA的結(jié)合親和力高,因此納米載體常用HA做表面修飾以作為腫瘤細胞的靶向藥物載體。外泌體是天然的靶向信息傳遞載體,有研究在外泌體中檢測到CD44。H?rk?nen等[1]使用胃癌細胞MKN74研究了CD44表達對外泌體分泌,HA合成與腫瘤細胞生長的影響。結(jié)果表明,CD44促進了細胞表面和細胞間的HA形成,調(diào)控腫瘤微環(huán)境;CD44可改變外泌體的物理性質(zhì)以及靶向性質(zhì)。

其中,研究人員使用Exoview檢測了MKN74細胞的未經(jīng)純化的培養(yǎng)基及分離純化后的外泌體中的含CD44以及其他標記物的含量。結(jié)果表明,相對于對照組,MOCK(CD44敲除)細胞組在未經(jīng)純化的培養(yǎng)基及分離純化后的分泌外泌體的數(shù)量顯著降低。以上結(jié)果表示ExoView可以直接對復(fù)雜環(huán)境的培養(yǎng)基進行檢測,無需分離純化步驟,且檢測結(jié)果具有*特異性。

ExoView檢測表達不同蛋白標記物的外泌體數(shù)量


參考文獻:[1] H?rk?nen, K., Oikari, S., Kyykallio, H., Capra, J., Hakkola, S., Ketola, K., ... & Rilla, K. (2019). CD44s assembles hyaluronan coat on filopodia and extracellular vesicles and induces tumorigenicity of MKN74 gastric carcinoma cells. Cells, 8(3), 276.




Cancer Cell Int:外泌體與miRNA調(diào)節(jié)成神經(jīng)管細胞瘤的干細胞性


腦瘤中部分細胞具有干細胞特性,能夠自我更新并分化為不同細胞系。其中,成神經(jīng)管細胞瘤的病人有25%經(jīng)過傳統(tǒng)療法后5年內(nèi)復(fù)發(fā)并轉(zhuǎn)移導(dǎo)致死亡,存活的病人也受到治療副作用和并發(fā)癥影響,因此需要一種安全有效的治療方法。腫瘤細胞的外泌體含有miRNA,能夠調(diào)節(jié)細胞增殖、分化、代謝、凋亡等生理過程并與抗藥性相關(guān)。有研究表明腫瘤干細胞的外泌體運載了腫瘤細胞*的miRNA,能夠產(chǎn)生有利于腫瘤發(fā)展的微環(huán)境。Choi等[1]研究了成神經(jīng)管細胞瘤的外泌體及運載的miRNA及其在腫瘤康復(fù)中的潛在作用。其中,miR-135b和miR-135a在腫瘤干細胞中高表達,抑制兩者會導(dǎo)致具有腫瘤抑制作用的Angiomotin?like 2(AMOTL2)表達上升,使腫瘤干細胞的干細胞特性下降。

其中,研究人員使用ExoView通過熒光成像檢測腫瘤細胞與腫瘤干細胞的外泌體標記物,在兩種細胞的外泌體上均檢測到了Alix和Syntenin兩種內(nèi)蛋白,并且可以確定兩種內(nèi)蛋白與CD63/CD9外泌體標記物共定位。

Exoview檢測外泌體上的Alix(a)與Syntenin(b)蛋白


參考文獻:[1] Choi, S. A., Koh, E. J., Kim, R. N., Byun, J. W., Phi, J. H., Yang, J., ... & Kim, S. K. (2020). Extracellular vesicle-associated miR-135b and-135a regulate stemness in Group 4 medulloblastoma cells by targeting angiomotin-like 2. Cancer cell international, 20(1), 1-14.

ExoView外泌體全面表征試劑盒


外泌體計數(shù)、粒徑、蛋白表達、蛋白共定位一次完成


檢測樣本類型

對細胞培養(yǎng)上清、血漿、血清、尿液、腦脊液、唾液等生物樣本中的外泌體直接進行分析

捕獲抗體種類

anti-CD81, anti-CD9, anti-CD63, 同型IgG對照;可自定義

單次上樣體積

35 µl稀釋樣本

重復(fù)檢測數(shù)目

3復(fù)孔

熒光抗體種類

CD9(Blue)/ CD81(Green)/ CD63(Red)




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